عنوان صفحه
مرور كلي بر اصول PCRو...................................................................................... 1
مقدمه............................................................................................................. 5
عواملي كه در ميزان موفقيت يك واكنش PCRموثرند.................................................. 6
غلظت واكنشگرها............................................................................................. 7
غلظت يونMg2+............................................................................................... 7
غلظت ساير يون ها........................................................................................... 8
غلظت پرايمرها................................................................................................. 11
غلظت DNAالگو (template DNA)و......................................................................... 16
غلظت دزكسي نوكلوئيك اسيدتري فسفات ها (dNTPs)و.......................................... 18
غلظت آنريم DNAپلي مراز (Taq DNA polymerase)و................................................ 21
انتخاب و طراحي پرايمرها (Designing PCR programs)و............................................ 22
انتخاب برنامه هاي دمايي و زماني (Choosing PCR programs)PCRو........................... 23
دماي شروع واسرشته گي براي DNAالگو............................................................... 24
دما و زمان واسرشتگي در طول واكنش (Denaturation step during cycling)و................ 25
زمان و دماي اتصال پرايمرها به رشته الگو (annealing temperature)و.......................... 26
زمان و دماي براي طويل شدن پرايمرها (Primer extension)و...................................... 27
تعداد دورها (Cycle number)و.............................................................................. 28
برنامه طويل سازي نهايي (Final extension)و......................................................... 31
كيفيت DNAالگو (quality of template)و................................................................. 32
نوع آنزيم DNAپلي مراز....................................................................................... 33
حجم واكنش (reaction volume)و......................................................................... 34
اضافه شوندهها (sample handing)و...................................................................... 35
برداشت و سمپل كردن واكنشگرها (sample handling)و........................................... 37
مسئلهي آلودگي در واكنش PCRو......................................................................... 38
PHبافرهاي مورد استفاده در واكنش PCRو.............................................................. 40
تكنيك مورد استفاده در واكنش PCRو..................................................................... 40
Touch down PCRو............................................................................................ 40
Hot star PCRو.................................................................................................. 41
Booster PCRو................................................................................................... 42
Nested PCRو.................................................................................................... 43
كارايي ترموسايگلر............................................................................................. 44
جدول1:يك روش مطلوب براي واكنش PCRو............................................................. 45
جدول2:يك روش پيشنهادي براي تغيير همزمان يك يا چند واكنشگر براي پيدا كردن بهترين
شرايط يك واكنش PCRجديد................................................................................. 46
جدول3:كنترل هاي مناسب براي انجام واكنش PCRو................................................. 48
جدول4:راهنماي عيب يابي................................................................................. 49
منابع.............................................................................................................. 61
دسته بندی موضوعی | موضوع فرعی |
علوم پایه |
زیست شناسی
|